先把质粒整合到染色体上后,用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系,就行成了稳定表达的细胞株。细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经首次传代成功后即为细胞系, 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系, 如可以连续培养, 则称为连续细胞系, 培养50代以上并无限培养下去。细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲,可培养到40-50代。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。
细胞株开发是做什么的?
工程细胞株开发涉及细胞培养及转染,单细胞克隆及单克隆源性验证,蛋白表达及结构特征筛选及鉴定,最终获得优质的细胞株。稳定细胞株广泛用于许多重要的应用,包括生物制品(如重组蛋白和单克隆抗体)生产、药物筛选和基因功能研究。开发稳定细胞株的过程通常始于将所需的质粒转染至选定的宿主细胞,一般是 cho 或 hek 293 细胞。转染后,研究人员随后筛选和定量分析高表达的细胞克隆。一旦检测到这些高产细胞株,便进一步对这些细胞和其产生的蛋白质进行验证。传统上用于细胞株开发的手动筛选方法耗时且需要大量劳力,因此对于此类工作,存在对高通量、自动化解决方案的巨大需求。